高效液相色谱仪HPLC
仪器型号: 赛默飞3000、安捷伦1260、沃特斯2695
液体需要1ml,粉末需要20mg,且在常规溶剂中溶解性较好。
1.你们这个仪器的检测限是多少?
这个要根据您自身的样品,因为不同的样品的响应会有较大差异,一般来说HPLC,个位数的ppm是没有问题的。
2.你们这边柱子是什么型号的?
柱子的型号有常规的C8和C18的,非常规的需要我们进行确定。
3.你们这边是什么检测器?
检测器有DVD光电二极管阵列、FID荧光、UVD紫外、RID示差折光,ELSD蒸发光。
4.这边样品是否可以进行前处理?
简单的样品前处理如过滤超声都是可以做的,生物样品或者衍生化需要具体确定。
5.色谱数据能否达到测试预期效果?
这个我们都是根据方法和实际样品去进行检测,不能百分百的保证,只能用我们实际检测出来的结果给您。
6.你们这边可以提供标样和方法么?
一般不提供,需要您提供标准品和液相条件的。
7.请问是怎么进行定量的?
标准品建立外标曲线,一般是5点或3点,也可以单点定量。
8. HPLC如何定量?
答∶HPLC定量时,最常使用外标法(定量原理:峰面积或者峰高随浓度的变化而相应变化)。若使用其他定量方式,请提前沟通。若使用外标法,除填写对接单外,您需要在对接单中额外补充:
A、目标物质的标品-做外标;
B、目标物质的浓度范围-决定外标定量范围。
9. HPLC如何定性?
答∶HPLC定性时,是以保留时间定性。此步骤也需要您提供标准品,通过比对标准品与待测物质的保留时间来定性。如果您样品成分复杂,存在待测物质的出峰情况受样品中其他物质的干扰的可能性,就算保留时间能与标准品对应上,但不能确认样品中含有该标准品物质。所以HPLC用于定性时目标物质纯度应该较高。
10. 目标物质含量较低,可能测不出怎么办?
可以进行浓缩的预处理,因为一般天然样往往含量较低,低于检出限,但是富集之后可以在检出限内进行定量)。缺点是需要确认合适的预处理步骤。
具体的浓缩的预处理过程务必由客户提供,因为不同目标物质浓缩步骤往往有所区别,根据目标物选择合适的浓缩步骤,对检测结果的准确性有着至关重要的作用。
11. 仪器的检出限是多少?
答∶正如毒理学中“抛开剂量谈毒性”的含义,HPLC检出限也并不是一个准确值。
检出限的定义为:某特定分析方法在给定的置信度内可从样品中检出待测物质的最小浓度或最小量。即,抛去其他细节因素,主要影响HPLC检出限的是测试方法以及对应测试物质。
举例:假如客户A的样品是液体样,需要检测其中四环素的含量。那么我们需要先按照测试方法设置好仪器,然后进标样,直到可以判定标品中存有浓度明显高于空白(大多是3倍噪声)的四环素出峰,这一标样浓度可以称为检出限。
如果在自身样品各种信息都没有提供的前提下,直接问仪器检出限是多少?就说明欠缺对检出限定义、HPLC基础原理的理解。
12. HPLC和LCMS最显著的区别?
答∶液相色谱可以后搭多种检测器,如紫外检测器,荧光检测器、蒸发光检测器、质谱检测器等。搭配质谱检测器的这类成为LCMS。两者本身的重点就有所偏重。前面几种检测器,在判定物质时,更依赖于标品定性,一般是默认一个峰为一个物质,因此对分峰要求较为严格;而LCMS由于其质谱检测器的灵敏性,重点在于碎片的区分。即使LCMS上显示是一个峰,也可以根据质谱数据判定前半个峰、后半个峰、甚至峰顶是否是同一个物质。所以属于两种检测手段,两者数据不具有对比性。