基质辅助激光解吸-飞行时间质谱仪MALDI-TOF-MS
仪器型号: Bruker Autoflex Speed TOF/TOF
1. 制样说明
样品状态:可为液体、粉末、块状样品
粉末样品:细细的粉末5-10mg,在合适的溶剂中溶解性可以或者分散,常用溶剂为甲苯、丙酮、甲醇、乙腈、三氟乙酸、水、乙酸乙酯、乙醚、THF。
液体样品:需要备注液体样品的具体浓度(一般要求不低于1mg/mL),以及缓冲液的成分(一般建议Tris,碳酸氢铵,浓度在20mM以下)
2. 样品要求
样品中绝对不可以含有不挥发性的盐,会造成喷雾针堵塞,对设备造成损害。
如果对基质有要求,请自行备注,常用的测试基质为:CHCA、DHB、SA
测试结果给出的是PDF格式的质谱图和原始数据,如下图所示:
1、问:对样品的要求?
答:如果是液体样品,需要备注液体样品的具体浓度(一般要求不低于1mg/mL),以及缓冲液的成分(一般建议Tris,碳酸氢铵,浓度在20mM以下)
2、问:我的样品含盐,可以测试吗?
答:不挥发性的盐绝对不可以,会造成喷雾针堵塞,对设备造成损害。(喷雾针很贵,好几万,其他盐是什么盐?问清楚)。
3、问:测试基质是什么?
答:如果对基质有要求,请自行备注,常用的测试基质为:CHCA,DHB,SA
4、问:飞行时间质谱的特点?
答:与常规使用的质谱仪相比,MALDI-TOF MS具有灵敏度高、准确度高、分辨率高、图谱简明、质量范围广及速度快等特点,在操作上制样简便、可微量化、大规模、并行化和高度自动化处理待检生物样品,而且在测定生物大分子和合成高聚物应用方面有特殊的优越性。
5、问:主要应用?
答:检测和鉴定多肽、蛋白质、多糖、核苷酸、糖蛋白、高聚物以及多种合成聚合物
6、问:Moldi-TOF-MS原理?
答:当用一定强度的激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜,基质从激光中吸收能量,基质-样品之间发生电荷转移使得样品分子电离,电离的样品在电场作用下加速飞过飞行管道,根据到达检测器的飞行时间不同而被检测,即测定离子的质量电荷之比与离子的飞行时间成正比来检测离子。
7、问:测试包括解析吗?
答:除了组学研究等特殊研究除外,解析都需要另外收费。
8、问:可以确定化合物结构吗?
答:如果是已知物,可以确定,未知物需要结合其他测试。
9、问:测试后我可以得到哪些信息?
答:分子量、碎片离子峰预测官能团、高分辨质谱还能预测分子式。
10. 测试时正负离子模式需要如何确认?
需要查文献确认一下,分子结构不同,有的更容易带正电,有的更容易带负电,正离子看的是带正电的离子,负离子看带负电的。如果确实不知道那个模式测试,建议先正离子模式测一下,但是要求两个模式都测试一下的,算两个样品收费。
11. 样品不纯可以测么?
需要确认下目标产物和杂质那个更易电离,如果产物易电离,杂质不电离,没影响的,反之就不行了。
12. 测试结果中为什么没有峰?
可能的原因:没有目标产物、样品浓度太低,样品不离子化,基质不合适
13. 选择基质的一般建议
先建议查下文献,确认下自己的条件,一般是蛋白类样品建议SA ,1万以下的建议DHB或者CHCA,常规DHB或者CHCA适用于80%的样品。常规:SA—常用于蛋白大分子,DHB— 常用于肽段及小分子,CHCA—常用于肽段及部分小分子。