1. 无条带出现：

- 原因：蛋白样本不足、抗体不匹配或失效、抗原缺失或变性、封闭不充分、洗膜过度等。

- 解决方案：增加样本量、使用合适的抗体、确保蛋白未变性、充分封闭、减少洗膜次数和时间。

2. 高背景：

- 原因：封闭不充分、抗体稀释不当、封闭液/抗体中含有非特异性结合成分。

- 解决方案：充分封闭、优化抗体稀释比例、使用新鲜或更干净的抗体。

3. 条带模糊或拖尾：

- 原因：凝胶不均匀、电泳时间过长或电压过高、转膜不均匀。

- 解决方案：制作均匀的凝胶、调整电泳时间和电压、检查转膜设备。

4. 分子量不准确：

- 原因：蛋白Marker选择不当、电泳条件不稳定、转膜效率不均一。

- 解决方案：选择合适的Marker、优化电泳条件、确保转膜效率。

5. 非特异性条带：

- 原因：抗体特异性差、封闭不充分、膜处理不当。

- 解决方案：使用特异性更高的抗体、充分封闭、优化膜的处理步骤。

6. 条带弱：

- 原因：蛋白表达量低、抗体浓度过低、封闭液或抗体中含有 。

- 解决方案：增加蛋白样本量、提高抗体浓度、更换封闭液。

7. 条带偏移：

- 原因：电泳过程中凝胶未完全固定、转膜时缓冲液渗漏。

- 解决方案：确保凝胶固定良好、检查转膜设备密封性。

8. 条带消失：

- 原因：抗体失效、抗体储存条件不当、洗膜过度等。

- 解决方案：检查抗体保存状态、避免洗膜过度、使用新抗体。

9. 重复性差：

- 原因：实验操作不一致、试剂批间差异。

- 解决方案：确保每次实验条件一致、使用相同批次的试剂。

10. 高分子量拖尾：

- 原因：样本中存在高分子量聚集体、转膜缓冲液pH值不当。

- 解决方案：优化样本处理、调整转膜缓冲液pH值。