1. 染色剂过度沉淀：

- 过多的染色剂可能会导致样品周围形成厚重的染色剂沉淀，影响样品的观察。可以减少染色剂的使用量，并优化滴加和吸水步骤。

2. 染色剂分布不均：

- 样品和染色剂不能完全混合时，可能造成染色不均匀。可以使用网格倾斜技术来帮助染色剂和样品更好地混合。

3. 样品聚集：

- 蛋白质或其他生物分子可能会因为高浓度或者加入染色剂而聚集成块，影响样品的单个结构观察。可以通过稀释样品和调整染色剂浓度来减少聚集。

4. 样品干燥不充分：

- 样品上的水分未完全除去可能造成染色剂分布不均，影响图像质量。确保样品充分干燥后再进行染色。

5. 染色剂不兼容：

- 部分染色剂可能与样品不兼容，导致样品结构变形或解离。使用适合样品的染色剂，并预先进行兼容性测试。

6. 对比度不足：

- 如果染色后样品的对比度不足，可能无法清晰观察样品结构。可以尝试不同的染色剂或染色浓度。

7. 样品损失：

- 在吸水或冲洗过程中可能会造成部分样品的损失。轻轻吸水，并确保网格不直接接触到吸水纸，以减少样品损失。

8. 背景噪声：

- 有时负染色后的样品背景噪声会过高，影响图像解析。可通过调整染色剂浓度、优化制备技术和使用图像处理软件来降低噪声。

9. 样品吸附不均匀：

- 样品不均匀地吸附到网格上可能会影响图像质量。温和地处理样品和网格，确保样品均匀分布。

10. 样品结构变化：

- 染色剂可能会对某些敏感样品造成结构变化。在不改变样品结构的前提下，选择温和的染色剂和条件。

11. 网格污染：

- 网格的污染会直接影响样品的吸附和染色效果。使用前对网格进行清洁和验证其清洁度。

12. 样品浓度估计困难：

- 准备样品时准确估计样品浓度有时比较困难。可通过光谱光度计测定蛋白质浓度，或通过显微镜预检查样品浓度。